STM32H750 PB3、PB4、PB5配置成SPI功能需要额外处理JTAG功能吗？

你是使用的SPI1吧。SWD脚只是用到PA13 PA14，跟PB3、PB4、PB5没有关联。使用CubeMx配置的话，选择SWD后直接生成代码无须再做额外调整。你现在SPI无输出，再检查下配置和实现代码。可以拿现存的SPI库例程来验证。验证时，可以先将D-Cache关闭。