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噬菌体的增殖过程基本同其他病毒。 吸附 噬菌体的吸附有两个阶段:①可逆阶段,由随机碰撞或静电引力或氢键作用而相互接触,无任何特异性;②不可逆特异性结合阶段,不仅噬菌体与相应细胞表面产生牢固结合,且病毒粒子表面发生结构改变。 T4噬菌体尾部能与宿主细胞壁表面上的受体发生特异性结合,吸附于宿主细胞表面。 侵入 噬菌体侵入宿主细胞的方式通常是将核酸注入细胞,蛋白质留在细胞外。T4噬菌体能水解细菌细胞壁肽聚糖,其作用相似于溶菌酶,使细胞壁产生小孔,可以导致细菌细胞内容物漏出。但在正常病毒繁殖过程中,小孔很快会被细菌修复。 生物合成 噬菌体的复制比较复杂,如T4噬菌体的核酸为dsDNA,转录和翻译分为三期。它的复制循环仅需20- 30min,但与其他病毒比较,除早期转录、晚期转录外,还增加了次早期( delaye dearly)转录的阶段。 装配 T4噬菌体在生物合成时,分别合成噬菌体DNA、头部蛋白质亚单位、尾鞘、尾髓、基板和尾丝等部件,最后DNA收缩聚集,被头部蛋白质包围形成二十面体的结构,随之尾部也逐步装配起来 [2] 。噬菌体的装配也是高度有序的,如在头尾未完成装配之前,尾丝不与尾部装配,而只有完整的头与尾装配形成后,尾丝才能自动装配于尾部,以形成完整的噬菌体。 T4噬菌体的装配包括5个不同的步骤: 头的装配 噬菌体的头壳是最大、最复杂的部分,其头部(head)的结构组成涉及20个基因,这些基因分成两大簇集中排列在基因组上。T4的前头部(head)由衣壳蛋自gp23以及主要的装配核心蛋白gp22和上要内部蛋白gp IPⅢ聚集而成,这个过程发生于或近于宿主细胞膜上并且需要gp31、gp40、gp20和gp21以及宿主大肠杆菌基因产物的参与,在DNA装填之前,前头部上再加入gp24噬菌体缜部至少出5种T4蛋白,即gp13、gpN2、gpN4、gpN14和gpN6组成。 DNA装填 当T4头部外壳装配完成后,T4-DNA就随之装填到头壳中, 由于DNA长度为500nm,而T4头部的长度不0.1nm,因此DNA在头壳腔内是紧密折叠的,至于DNA是如何装进头壳的还不十分清楚。通常T4DNA的装填需要gp4、gp16和gp17的参与,基因49的ts突变体在较高温度下形成空头,温度降低时则产生正常充满DNA的头部。现在已经证实gp19具有核酸酶的活性,能够对复制屮的DNA多联体产生切割。值得指出的是每次DNA装填的长度要比正常T4-DNA基因组多出20%,这可能就是产生末端冗余的机制。 尾管和管鞘装配 尾管由T44个拷贝的gp19构成,其中每6个gp19分子组成一个环,这样就可产生由24环叠成的螺腚管。随后z装配成的尾管与基板连接,再在gp54引物的参与下,gp18围绕尾管聚合形成尾鞘。与gp19一样,gp18也是由T4个拷贝组成24个重叠环。最后在尾管的近末端加上即gp3和gp15,其中gp15可以稳定装配的尾鞘,并组成颈与颈圈附着的连接部。 T4噬菌体尾部和头部分别装配完成后,头和尾就可自发地产生结合,这种结合作用在体外和体内均可以发生,而且不需要额外基因产物的加入。 基板装配 基板是通过两个独立的装配程序形成的,由7个基因广物gp10、gp11、gp7、gp8、gp6、gp53和gp25相互作用形成的楔状物,以装配形成外部呈六角形结构的6个“臀”,另外由6个基因产物gp27、gp5、gp26、gp28、gp51和gp29相互作用,产生一个中心的“塞子”,再由一个塞子和6个臂结合而成一个不稳定的六角形前体结构,并且在另外4个基因产物gp9、gp12、gp48和gp54的参与下构成完整的基板。 尾丝装配 T4尾丝装配和附着于基板的6个顶角需要8个T4基因产物参与,其中gp37、gp36、gp35和gp34为尾丝的结构组分,gp38、gp57、gp63和 gpWac起附属和催化作用,一个完整的尾丝可能含有gp34、gp36、gp37各两个分子和一个分子的gp35,尾丝由远侧半段和近侧半段组成,gp37、gp36、gp35构成尾丝的远侧半段,gp34组成近侧半段,见g38和gp57为两个装配附属蛋白,它们是g37聚合所必需的;gp63和gpWac则是尾丝附着于基板所必需的。g63不出现在除菌体颗粒中,但它能使近侧半段尾丝的近端顶部与基板相互作用,gpWac还是噬菌体的颈须蛋白,由它组成的6根丝状物,即颈须附着项圈。尾丝装配与噬菌体颗粒其余部分无关,尾丝必需在头与尾连接之后才能附着于基板上。 |
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