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实验室如何进行非标方法的确认

2017-11-14 14:39:11 7006 实验室检测

方法发生变更时或颁布新标准时，如何对方法进行确认？非标方法如何进行方法确认？检测方法选择的核心是什么？.....

《实验室资质认定评审准则》5.3.2条款中规定：“实验室应确认能否正确使用所选用的新方法。如果方法发生了变化，应重新进行确认。实验室应确保使用标准的最新有效版本。”在《GB/T 27025-2008 检测和校准实验室能力的通用要求》条款中也有相应的规定。实验室采用的检验检测方法包括样品的抽取、处理、运输、存储和制备等各个环节，确认时应当记录确认所获得的结果、使用确认的程序、确认对方法是否适合于预期的用途等，必要时还应包括不确定度和分析数据的统计学处理技术。

检测方法确认的目的

确保实验室所采用的标准方法、非标准方法、实验室自制方法超出其预定范围使用的标准方法及经过扩充和更改的标准方法得到有效确认，保证上述方法适合于预期用途，并满足特定要求。

方法发生变更时或颁布新标准时，如何对方法进行确认：
1.在首次对外出具数据之前应确认标准方法已被正确的运用。
2.标准方法发生了变化应重新确认。
3.对标准方法定期清理或者查新，以确保最新有效版本。

1、检测方法的选择及使用要求

实验室资质认定(或认可)现场考核时确定的检测项目的依据是国家标准、行业标准和地方标准。所以说，当没有国际、国家、行业、地方规定的检验检测方法时，实验室应尽可能选择已经公布或由知名的技术组织或有关科技文献或杂志上公布的方法，但应经实验室技术主管确认。如是在实验室计量认证或认可批准业务范围内，因客户的特殊要求而发生的情况，其检验检测结果和报告上应有明确的说明。

另外需要使用非标准方法时，这些方法应征得委托方同意，并形成有效文件，使出具的报告为委托方和用户所接受。这是指必须在实验室计量认证或认可批准业务范围内使用，所谓有效文件是指甲乙双方对使用非标准方法检测达成协议，一般来说应有双方签字盖章，也可以在检测委托（协议）书上注明，实验室在检测报告中也必需加以说明。因此，在检测方法的选择上，优先使用国家标准，然后是行业标准、地方标准，非标准方法仅限于委托方同意才使用。

对于实验室完成的每一项或每一系列检验检测的结果，均应按照检验检测方法中的规定，准确、清晰、明确、客观地在检验检测证书或报告中表述，应采用法定计量单位。证书或报告中还应包括为说明检验检测结果所必需的各种信息采用方法所要求的全部信息。除上述明确的要求外，检测报告中必需有检测数据和结论。

所以说，检测方法选择的核心就是方法有效性，要特别注意的是：要使用最新有效版本的方法。

2、检测方法的验证及确认

当实验室将标准方法引入到自身的检测工作时，则应对引入的标准方法进行验证，并正确有效地运用。

标准方法确认准则：所用的设备、环境条件、人员技术等。以证明实验室能够正确使用该新标准实施检测过程。

标准方法的确认或是通过核查方式，并提供客观证据，以证实某一特定预期用途的特殊要求得到满足。用于确定某方法性能的技术宜是下列情况之一，或是其组合：
a.使用参考标准或标准物质(参考物质)进行校准；
b.与其他方法所得的结果进行比较；
c.实验室间比对；
d.对影响结果的因素作系统评审；
e.根据对方法的理论原理和实践经验的科学理解，对所得结果不确定度进行的评定。

实验室应按照制定的相关工作程序选择上述方法进行验证，确认将要使用的检测方法是否满足要求，在确认方法确实可行后，方可投入使用。

对于方法确认来说主要有：变更后的标准确认和新方法的确认。在确认时应该做方法的标准曲线、添加标准回收率试验、最低检出限试验和精密度试验等，并考虑方法的特异性和耐用性，如果需要时还应进行不确定度评估。应用实验数据真实地证明方法的适用性、准确性和灵敏性。

1. 非标方法的确认
在《实验室资质认定评审准则》5.3.5条款中规定：实验室自行制订的非标方法，经确认后，可以作为资质认定项目，但仅限特定委托方的检测。非标准方法是指未经相应标准化组织批准的检测/校准方法。只有在尚无国家标准、行业标准、地方标准时，实验室方可自制非标检测方法，应经过确认:
  a、从理论到实际对方法的理解；
  b、使用标准物质或参考标准进行校准；
  c、与不同方法所得的结果进行比较；
  d、实验室间的比对试验；
  e、结果不确定度评定。
必要时对方法确认过程得到的测量值是否满足顾客的技术要求进行评审，这些值可包括：测量结果的不确定度、检出限、方法的选择性、线性、重复性限、复现性限、抵抗外来影响的稳健性和抵抗来自样品的基体干扰的交互灵敏度，可根据具体方法确定。当缺乏信息时，一些指标如：准确度、检出限、选择性、线性、重复性、复现性、稳健度和交互灵敏度等的范围和不确定度，可以用简化方式给出。经过验证和确认后形成文件，方可依据该方法检测（限在特定委托方的检测），并应征得客户同意。实验室应使用适当的方法和程序进行所有检测工作及职责范围内的其他有关业务活动（包括样品的抽取、处置、传送和贮存、制备，测量不确定度的估算，检验检测数据的分析）；这些方法和程序应与所要求的准确度有关检验检测的标准规范一致。主要的目的要求是建立符合实际的检测流程图，通过流程图找出关键的要素。不同的检测对象应有不同的检测流程图。

2.变更后的标准确认
标准如果一旦变更，就要对照新旧标准的变化情况，对方法涉及的仪器设备、实验材料、环境条件的变化，以及技术人员的配备是否满足标准方法要求进行分析，将这些信息反馈给技术负责人，让技术负责人决策是否提供相关的资源来适应标准变更后的要求。当相关的资源配备后，实验室应通过做实验来验证能够正确运用变更后的标准方法。这个过程就是标准方法的确认。

标准变更的处置：
① 对于只是标准代号或年号变更，其检验检测方法、技术指标或技术参数没有变化的原已通过的认证项目，只需将标准名称和代号用文字说明统一汇总后，填写《计量认证检测标准变更备案审批表》，报实验室资质认定部门办理标准变更手续。
② 对于不仅是标准年号发生变化，检验检测方法、技术指标或技术参数也随之提高，实验室必须配备新的相应仪器设备才能满足标准要求，或人员须经过培训才能操作仪器设备。属于检测性质发生变化，实验室应申请扩项（扩标准）评审，接受实验室资质认定部门组织的评审，经评审组现场确认后，由发证机关发放新的项目附表。
如果涉及标准方法换版时，应重新对检测方法进行验证及确认，验证及确认包括以下内容：
  a、新旧标准的差异分析；
  b、执行新标准所需人员的评价，必要时进行培训，经考核确认后授权上岗；
  c、现有仪器设备适用性以及校准方法的评价，必要时补充相应仪器设备或重新校准；
  d、环境条件的评审，必要时增添设施；
  e、原始记录表格和报告格式的评审，必要时要进行修订。
对换版后的标准方法经上述各方面验证及确认后，条件均能满足要求，方可按照该标准方法实施投入检测使用。

3.新方法的确认
凡是未使用过的标准方法对实验室来说就意味着是新方法，对新方法也都应进行确认。检测方法确认的技术要求有如下方法:

①回收率试验
对于食品中的禁用物质，回收率应在方法的测定低限、两倍方法测定低限和十倍方法测定低限进行三水平试验；对于已制定最高残留量(MRL)的，回收率应在方法测定低限、MRL，选一适合点进行三水平试验；对于未制定MRL的，回收率应在方法测定低限、常见限量指标，选一适合点进行三水平试验。

②校准曲线
应描述校准曲线的数学方程式以及校准曲线的工作范围，浓度范围尽可能覆盖一个数量级，至少作5个检测点(不包括空白)。对于筛选方法，线性回归方程的相关系数(r )不应压于0.98，对于验证方法，相关系数(r )不应低于0.99。测试溶液中被测组分浓度应在校准曲线的线性范围内。

③精密度试验
对于食品中禁用物质，精密度实验应在方法测定低限、两倍方法测定低限和十倍方法测定低限三水平进行：对于需制定MRL的，精密度试验应在方法测定低限、常见限量指标、选一适合点三水平进行。重复测定次数至少为6次。

④测定低限
方法的测定低限按下式计算:
CL =3Sb/b
式中: CL—方法的测定低限；
Sb—空白值标准偏差(一般平行测定20次得到)；
b—方法校准曲线的斜率。
对于已制定MRL的物质，方法测定低限加上样品在MRL处的标准偏差的三倍，应超过MRL值。对于禁用物质，方法测定低限应尽可能低。（也可采用标准加入试验法确定。）

⑤准确度
重复分析标准物质（实物标样）或水平测试样品，测定含量（经回收率校正后），得出平均值与真值的偏差（变异系数）。

⑥提取效率
提取效率可用以下方法进行试验：
a、用阳性的标准物质和水平测试的阳性样品进行试验；
b、阳性样品用桶—溶剂反复提取，观察被分析物的浓度变化；
c、用不同提取技术或不同提取溶剂进行比较。

3、标准的查新和受控使用

对实验室使用的标准，应定期进行清理和查新，实验室应确保使用的标准为最新有效版本。可通过网络查询在用标准的现行有效性，查新方式：
①向标准情报部门查询；
②订购权威机构出版的国家标准；
③从期刊获取最新信息；
④应用互联网查询；
⑤参加技术交流会。
与实验室工作有关的标准、手册、指导书等都应现行有效并便于工作人员使用。对于现行有效的标准版本要受控发放，对于已作废的标准，要加盖作废标识并撤离实验场所，以免误用。
在标准文件查新、更新工作中，各相关部门要配合和协助质量管理部门跟踪查新、更新工作，质量管理部门要定期发放更新信息，并将查新内容汇总及做好保留查新、更新工作记录。

实验室非标方法和方法的偏离是一回事吗？

偏离是一种临时措施，它是一种让步的书面许可，必须在一定的范围内（如误差）、一定的数量、一定的时间内，必要的让步。
偏离不是永久的或者是长久的行为，它是暂时的也就是说临时需要的行为。标准允许的只是方法偏离，偏离包括对标准方法和非标准方法的偏离。
偏离要具备四个条件才允许。
1，偏离有文件规定（只要有文件规定，不一定是程序文件，可以是规范或作业指导书都可以）；
2，经技术判断，即偏离不会影响数据和结果的正确性和可靠性，如果会影响正确性和可靠性就不允许偏离；
3，获得批准，需得到授权人批准，如技术管理者批准等；（以上都是实验室内部需控制的要求。）
4，还需得到客户同意。也就是说不是实验室想偏离就偏离，客户不同意是不可以偏离的。体现了为客户服务的宗旨。
偏离千万不要与非标准方法混为一谈。非标准方法经确认后可以使用一段时间，甚至很长一段时间，即标准方法面世前一直可以使用。
偏离只能临时使用。一直偏离就不是偏离，就需要修改标准，包括标准方法和非标准方法的修改。

确认方法特性参数的选择

1 方法确认首先要明确检测对象特定的需求，包括样品的特性、数量等，并应满足客户的特殊需要，同时应根据方法的预期用途，选择需要确认的方法特性参数。典型的需要确认的方法特性参数见下表。

典型方法确认参数的选择

确证方法		筛选方法
待评估性能参数	定量方法	定性方法	定量方法	定性方法
检出限*	√	√	√	√
定量限	√	√	-	-
灵敏度	√	√	-	-
选择性	√	√	√	√
线性范围	√	-	√	-
测量区间	√	-	√	-
基质效应	√	√	√	-
精密度（重复性和再现性）	√	-	√	-
正确度	√	-	-	-
稳健度	√	√	√	√
测量不确定度(MU)	√	-	-	-