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原料及制造粗糙主要表现在:准确度不高,重复性不好。可能是因为抗体配对效果不是最佳,抗体识别抗原的表位容易被破坏,包被抗体或检测抗体杂蛋白较多,没有纯化或纯化效果不好,影响检测的灵敏度和准确度。
检测ELISA试剂盒优劣的方法: 1. 选定一个检测范围内的浓度做多孔重复,可看出平行性好不好。即板内CV值的大小,此操作时需要小心加样的准确性。对一些制作较粗糙的试剂盒来说,板间CV值是较大的。 2. 可采用已知浓度的重组细胞因子,稀释到检测范围内作为样本加入,看检测的准确性。 3. 对用待测指标的重组细胞因子做试剂盒说明书上标定的最小浓度稀释,可测出灵敏度,建议5个复孔以上才有意义。一般厂家以20个复孔做出的结果作为检测限。用此实验可验证出所购试剂盒的灵敏度是否如说明书所述,也可判断出所购试剂盒是否有夸大之说。 4. 如果有相同指标的进口试剂盒,可用对方的标准品作为样本,分别加入各自的试剂盒做检测,以检测试剂盒的真实性,准确性。如其中一种是知名的,比较可靠的话,可作为标准来验证另一试剂盒的准确程度。 |
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