一天交付？你可能遇到了假的PAGE纯化

2017-9-22 16:43:45 1647 基因编辑

0 天下武功唯快不破，引物纯化快未必行。为了控制实验进度，我们总会希望可以更快的拿到订购的引物，但质量和时间却是鱼和熊掌不可兼得，切勿因心急选了假的PAGE纯化。 1引物纯化选择引物纯化方式的选择不仅决定了合成引物的质量，同时也带来了交付周期上的差异。目前引物的纯化方式基本分为DSL（脱盐）级别、PAGE级别及HPLC纯化，其中HPLC纯化的质量最好，相应的周期也最长。除非对引物要求特别高的如修饰引物、诊断引物等会选择HPLC纯化，其余更多的会选择PAGE纯化及DSL（脱盐）纯化。合成引物时，如果选择DSL纯化，基本可以做到隔夜交付，但对于PAGE纯化却是不行。为什么PAGE纯化的引物周期不能像DSL纯化的周期一样短呢？我们不妨从不同纯化方式的原理和处理流程来一窥究竟。 2纯化原理和处理流程差异 DSL（脱盐）: 又称为简易反相柱，氨盐可以被有机溶液洗脱，但不会被水洗脱，能有效的去除盐分，纯度可满足大多分子生物学实验需求，但不能有效去除比目的片段略短的引物小片段。 DSL纯化简化流程: 合成→ 过柱纯化（脱盐）→ 定量→ 发货。 PAGE纯化法: 完成DSL纯化后，使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。在一定电场强度下，由于迁移速率不一样，引物按长度在PAGE胶中进行分离，分离后切胶回收，胶块浸泡在NaCl溶液中，引物将从胶块中渗透出来，再进行纯化去除回收过程中的钠盐。该方法可以去除合成中的短链引物，纯化效果（特别是长链）很好，可以直观看见质控环节。当然，PAGE纯化也存在一些局限，比如实验步骤多、费人工以及样品损失量大等。 PAGE纯化简化流程：合成→ 过柱纯化（脱盐）→ 跑胶分离（3-4h）→ 回收（5-6h）→ 纯化（1h） → 定量→ 发货从以上流程可以看出，PAGE纯化比DSL纯化至少多用1天的时间。如果缩短电泳时间，引物在凝胶中的分离程度会受影响，从而降低引物回收的质量。 3总结引物质量对实验的成功起着至关重要的作用，而这很大程度上与所选择的纯化方式密切相关。不同纯化方式的原理和处理流程，一方面决定了引物的交付质量，另一方面也限定了所需要的处理周期。在我们的科研工作中，需要依据研究的质量要求和项目进度情况选择相应的纯化方式。基因编辑：https://www.genewiz.com.cn/Public/Services/GE 0
2017-9-22 16:43:45　　评论淘帖0 举报相关推荐 • 你的iPhone续航一天不如一天? 这款iPhone表示不服! 364 • 新的一天新的开始 1368 • 新的一天？ 2098 • 你一天之中对着电脑的时间多长？！ 1739 • 三星给与员工每月一天周五带薪假 802 • 你可能遇到假宽带了,公布的网速数据为何差别如此之大 1294 • 一天入门STM32 0 • 一天入门STM32 65 • 一天入门STM32 0